Скачать статью в PDF формате
Научная статья
УДК 619.576.895.132
https://doi.org/10.31016/1998-8435-2025-19-2-263-271
Выявление генотипа паразитических нематод Teladorsagia circumcincta, резистентного к антигельминтным препаратам бензимидазольного ряда
Пименов Илья Александрович1, Одоевская Ирина Михайловна2
1,2 Всероссийский научно-исследовательский институт фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений – филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр – Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К. И. Скрябина и Я. Р. Коваленко Российской академии наук» (ВНИИП – фил. ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН), Москва, Россия
1 Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы (РУДН), Москва, Россия
1 pimenov@vniigis.ru, https://orcid.org/0009-0001-8712-6073
2 odoevskaya@vniigis.ru, https://orcid.org/0000-0002-3644-5592
1 Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы (РУДН), Москва, Россия
1 pimenov@vniigis.ru, https://orcid.org/0009-0001-8712-6073
2 odoevskaya@vniigis.ru, https://orcid.org/0000-0002-3644-5592
Аннотация
Цель исследований – выявление резистентных к антигельминтным препаратам бензимидазольного ряда штаммов паразитических нематод Teladorsagia circumcincta молекулярно-генетическими методами.
Материалы и методы. Животные: овцы породы «Южная мясная» возрастом от 8 до 12 мес. Паразитические нематоды сем. Trichostrongylidae были получены из сычугов овец. Самцов и самок нематод сохраняли в отдельных промаркированных пробирках типа «Эппендорф» при -20 °С. Молекулярно-генетические исследования. Выделение нативной геномной ДНК проводили с использованием коммерческого набора для экстракции ДНК из микроколичеств тканей «ДНК-Экстран-2» («Синтол», Москва). Проведение «вложенной ПЦР». Для амплификации ДНК использовали термоциклер T-100 Bio-Rad и коммерческий набор реактивов Master Mix, Евроген. Полученные фрагменты ДНК использовали в качестве основного компонента для проведения реакции рестрикции с эндонуклеазой RsaI («Сибэнзим», г. Новосибирск). Выявление резистентного генотипа T. circumcincta методом ПЦР. Мультиплексную ПЦР проводили в соответствии с рекомендациями Silvestre et al, 2000 с использованием коммерческого набора реактивов Master Mix, Евроген. Результаты электрофореза анализировали в гель-документирующей системе GelDoc, Bio-Rad. Секвенирование полученных фрагментов проводили в компании ЦКП «Геном» ФГБНУ «МГНЦ» (Москва).
Результаты и обсуждение. Для выявления мутаций в гене β-тубулина, приводящих к формированию резистентности у паразитических нематод вида T. circumcincta к антигельминтным препаратам бензимидазольного ряда, были проведены молекулярно-генетические исследования с использованием методов «вложенной» ПЦР, анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов и «мультиплексной» ПЦР. Результаты наличия нуклеотидных замен в гене β-тубулина были подтверждены секвенированием по Сэнгеру.
Ключевые слова: резистентность, нематоды пищеварительного тракта, Trichostrongylidae, Teladorsagia circumcincta, «вложенная» ПЦР, ПЦР-ПДРФ, рестриктаза, мелкий рогатый скот
Благодарность. Исследование выполнено при финансовой поддержке Гранта РНФ №23-26-00220.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Для цитирования: Пименов И. А., Одоевская И. М. Выявление генотипа паразитических нематод Teladorsagia circumcincta, резистентного к антигельминтным препаратам бензимидазольного ряда // Российский паразитологический журнал. 2025. Т. 19. № 2. С. 263–271. https://doi.org/10.31016/1998-8435-2025-19-2-263-271
Цель исследований – выявление резистентных к антигельминтным препаратам бензимидазольного ряда штаммов паразитических нематод Teladorsagia circumcincta молекулярно-генетическими методами.
Материалы и методы. Животные: овцы породы «Южная мясная» возрастом от 8 до 12 мес. Паразитические нематоды сем. Trichostrongylidae были получены из сычугов овец. Самцов и самок нематод сохраняли в отдельных промаркированных пробирках типа «Эппендорф» при -20 °С. Молекулярно-генетические исследования. Выделение нативной геномной ДНК проводили с использованием коммерческого набора для экстракции ДНК из микроколичеств тканей «ДНК-Экстран-2» («Синтол», Москва). Проведение «вложенной ПЦР». Для амплификации ДНК использовали термоциклер T-100 Bio-Rad и коммерческий набор реактивов Master Mix, Евроген. Полученные фрагменты ДНК использовали в качестве основного компонента для проведения реакции рестрикции с эндонуклеазой RsaI («Сибэнзим», г. Новосибирск). Выявление резистентного генотипа T. circumcincta методом ПЦР. Мультиплексную ПЦР проводили в соответствии с рекомендациями Silvestre et al, 2000 с использованием коммерческого набора реактивов Master Mix, Евроген. Результаты электрофореза анализировали в гель-документирующей системе GelDoc, Bio-Rad. Секвенирование полученных фрагментов проводили в компании ЦКП «Геном» ФГБНУ «МГНЦ» (Москва).
Результаты и обсуждение. Для выявления мутаций в гене β-тубулина, приводящих к формированию резистентности у паразитических нематод вида T. circumcincta к антигельминтным препаратам бензимидазольного ряда, были проведены молекулярно-генетические исследования с использованием методов «вложенной» ПЦР, анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов и «мультиплексной» ПЦР. Результаты наличия нуклеотидных замен в гене β-тубулина были подтверждены секвенированием по Сэнгеру.
Ключевые слова: резистентность, нематоды пищеварительного тракта, Trichostrongylidae, Teladorsagia circumcincta, «вложенная» ПЦР, ПЦР-ПДРФ, рестриктаза, мелкий рогатый скот
Благодарность. Исследование выполнено при финансовой поддержке Гранта РНФ №23-26-00220.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Для цитирования: Пименов И. А., Одоевская И. М. Выявление генотипа паразитических нематод Teladorsagia circumcincta, резистентного к антигельминтным препаратам бензимидазольного ряда // Российский паразитологический журнал. 2025. Т. 19. № 2. С. 263–271. https://doi.org/10.31016/1998-8435-2025-19-2-263-271
© Пименов И. А., Одоевская И. М., 2025