264-273 Возможности использования «вложенной» ПЦР-ПДРФ для таксономической идентификации личинок L3 семейства Trichostrongylidae, Leiper, 1912. Пименов И. А., Одоевская И. М., Плиева А. М. и др.

БИОХИМИЯ, БИОТЕХНОЛОГИЯ И ДИАГНОСТИКА

Скачать статью в PDF формате

Научная статья

УДК 619.576.895.132

https://doi.org/10.31016/1998-8435-2024-18-3-264-273

Возможности использования «вложенной» ПЦР-ПДРФ
для таксономической идентификации личинок L3
семейства Trichostrongylidae, Leiper, 1912

Илья Александрович Пименов ¹, Ирина Михайловна Одоевская ²,
Айшет Магомедовна Плиева ³, Анастасия Ивановна Варламова ⁴

^{1, 2, 4} Всероссийский научно-исследовательский институт фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений – филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр – Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К. И. Скрябина и Я. Р. Коваленко Российской академии наук» (ВНИИП – фил. ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН), Москва, Россия
³ ФГБОУ ВО «Ингушский государственный университет», Магас, Россия
¹ mr.pimenov123@yandex.ru, https://orcid.org/0009-0001-8712-6073
² odoevskayaim@rambler.ru, https://orcid.org/0000-0002-3644-5592 ³ aishet57@mail.ru
⁴ arsphoeb@mail.ru, https://orcid.org/0000-0001-8364-5055

Аннотация

Цель исследования – применить молекулярно-генетические методы исследований для выявления таксономической принадлежности паразитических нематод желудочно-кишечного тракта овец сем. Trichostrongylidae, используя «вложенную» ПЦР с последующим анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ).

Материалы и методы. Паразитические нематоды: личинки стронгилят L3, полученные в результате инкубирования проб фекалий овец. Выделение геномной ДНК проводили с использованием коммерческого набора для экстракции ДНК из микроколичеств тканей (фирма «Синтол», Москва), согласно рекомендациям производителя. Для амплификации ДНК использовали термоциклер T-100 Bio-Rad и коммерческий набор реактивов Master Mix, Евроген. Режим проведения ПЦР осуществляли согласно руководству WAAVP, 2006. Реакцию рестрикции эндонуклеазой RsaI амплифицированных фрагментов трихостронгилид проводили согласно рекомендациям фирмы-производителя фермента («Сибэнзим», г. Новосибирск).

Результаты и обсуждение. Для определения таксономической принадлежности личинок стронгилят, выделенных после инкубации фекалий, полученных от овец, были проведены молекулярно-генетические исследования методом «вложенной» ПЦР с последующим анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ). Данный метод дает возможность с наименьшими трудозатратами идентифицировать генотипы трех видов стронгилят: Haemonchus contortus, Trichostrongylus colubriformis, Teladorsagia circumcincta на стадии личинки.

Ключевые слова: Teladorsagia circumcincta, Haemonchus contortus, Trichostrongylus colubriformis, паразитические нематоды, трихостронгилиды, ПЦР-ПДРФ, рестриктаза

Благодарность. Исследование выполнено при финансовой поддержке Гранта РНФ №23-26-00220.

Прозрачность финансовой деятельности: никто из авторов не имеет финансовой заинтересованности в представленных материалах или методах.

Конфликт интересов отсутствует.

Для цитирования: Пименов И. А., Одоевская И. М., Плиева А. М., Варламова А. И. Возможности использования «вложенной» ПЦР-ПДРФ для таксономической идентификации личинок L3 семейства Trichostrongylidae, Leiper, 1912 // Российский паразитологический журнал. 2024. Т. 18. № 3. С. 264–273. https://doi.org/10.31016/1998-8435-2024-18-3-264-273