Скачать статью в PDF формате
English version
Изучение на основе нанотехнологий особенностей патогенеза и разработка эффективных способов лечения и диагностики трихинеллеза, описторхоза и трихоцефалеза человека
Бекиш В.Я., Зорина В.В., Кужель Д.К.
УО “Витебский государственный медицинский университет”, Беларусь
Введение. По данным ВОЗ, паразитарными болезнями в мире поражено более 4,5 миллиардов людей, причем на долю гельминтозов приходится 99% всех паразитозов. Инвазионные заболевания могут способствовать развитию тяжелых осложнений, иногда с летальным исходом.
Цель исследования - изучить на основе ДНК технологий особенности патогенеза и разработать оценку эффективности лечения и диагностики трихинеллеза, описторхоза и трихоцефалеза человека.
Материалы и методы. Объектами исследования были: трихинеллы, их инвазионные личинки; описторхисы, их метацеркарии; власоглавы, их инвазионные яйца; мыши-самцы линии СВА в количестве 140 особей; крысы белые беспородные (самки, самцы) в количестве 213 особей; золотистые хомяки в количестве 305 особей; кровь 36 пациентов с диагнозом - трихинеллез, 28 – описторхоз, 23 – трихоцефалез и 35 доноров крови; кровь, фекалии 88211 пациентов, сыворотка крови 3400 пациентов, обследуемых на гельминтозы. Использовали паразитологические, цитогенетические, морфологические методы исследований.
Результаты. Установлено, что метаболиты трихинелл во время их высокой биологической активности обладают гено- и цитотоксическим воздействиями на соматические ткани хозяина, вызывая рост одноцепочечных разрывов, щелочно-лабильных сайтов ядерной молекулы ДНК, апоптотических клеток в костном мозге. Изменения наблюдаются при тяжелом трихинеллезе на кишечной, а при легком, среднем, тяжелом – на миграционной стадиях инвазии с максимальной выраженностью этих эффектов. Гено- и цитотоксическое влияния метаболитов трихинелл усиливаются при увеличении дозы введенного инвазионного материала при заражении.
Мариты кошачьего сосальщика обладают генотоксическим воздействием на соматические клетки золотистых хомяков. Генотоксическое воздействие в клетках крови животных наблюдается на 7, 14, 21, 28, 35, 60, 90, 120 и 150-й дни инвазии с максимальной выраженностью в 8,2 раза на 14-21-й дни инвазии. В клетках крови, костного мозга и печени животных при описторхозе повышается уровень апоптотических клеток на 7, 14, 21, 28, 35, 60, 90, 120 и 150-й дни инвазии с наибольшими изменениями на 21-28-й дни инвазии.
Метаболиты власоглавов обладают генотоксическим воздействием на соматические клетки золотистых хомяков с 30 по 60-й день инвазии с максимальным ростом процента поврежденной ДНК клеток крови и костного мозга в 10,35 раз на 30-й день после заражения. В клетках крови и костного мозга животных при экспериментальном трихоцефалезе повышается уровень апоптотических клеток на 30, 40, 60-й дни инвазии с максимальной выраженностью (в 4,3 раза) на 30-й день после заражения.
Трехкратное применение албендазола либо мебендазола для терапии трихинеллеза у беременных самок крыс не снижает гено- и цитотоксических эффектов инвазии в клетках костного мозга и эмбрионов, а также приводит к достоверному повышению как пред-, так и постимплантационной гибели эмбрионов в сравнении с группами интактного контроля и зараженных не леченных животных. Применение албендазола или мебендазола в сочетании с ибупрофеном, фенкаролом и комплексом витаминов антиоксидантного характера с селеном не показало достоверных отличий уровней пред- и постимплантационной гибели от контрольного уровня, снизило гено- и цитотоксический эффекты в соматических и эмбриональных клетках хозяина до показателей интактного контроля.
Однократное применение празиквантела для терапии описторхоза у золотистых хомяков снижает генотоксический эффект инвазии и не изменяет цитотоксическое воздействие паразитов в клетках печени и крови в сравнении с зараженными не леченными животными. Специфическая терапия не нормализует высокие уровни поврежденной ДНК клеток крови и печени и их апоптоза по сравнению с показателями интактного контроля. Применение празиквантела в сочетании с ибупрофеном и комплексом витаминов антиоксидантного характера с селеном при терапии экспериментального описторхоза снижает гено- и цитотоксический эффекты инвазии в соматических клетках хозяина до показателей интактного контроля.
Трихинеллез средней тяжести у человека сопровождается гено- и цитотоксическим эффектами в лимфоцитах периферической крови больных, который характеризуется ростом количества поврежденной ядерной ДНК до 9,84% и апоптотических клеток до 8,15%. Применение мебендазола или албендазола в течение 14 дней для терапии трихинеллеза средней тяжести, не полностью элиминирует симптомы инвазии (эозинофилия, мышечные боли, аллергическая сыпь, отеки), приводит к снижению генотоксических и цитотоксических эффектов в лимфоцитах крови больных, но эти величины достоверно превышают показатели доноров крови. Комбинированное лечение албендазолом (7 дней) с ибупрофеном (5 дней) и комплексом витаминов с Se (7 дней) больных трихинеллезом средней степени тяжести служит эффективным способом защиты генома человека, так как приводит к снижению уровней первичных повреждений ДНК и апоптотических клеток до показателей доноров крови, а также приводит к полной элиминации основных симптомов заболевания.
Инвазия кошачьими сосальщиками у человека сопровождается гено- и цитотоксическим эффектами в лимфоцитах периферической крови пациентов, которае характеризуется ростом количества одноцепочечных разрывов, щелочно-лабильных сайтов ядерной ДНК до 5,16% и апоптотических клеток до 3,4 %. Монотерапия празиквантелом при лечении описторхоза не снижает гено- и цитотоксические эффекты в лимфоцитах крови пациентов, а также в 50% случаев для устранения основных симптомов заболевания, требует повторного назначения антигельминтика. Комбинированное лечение описторхоза празиквантелом с ибупрофеном и комплексом витаминов С, Е, β-каротин с Se приводит к полной элиминации клинических и лабораторных проявлений инвазии, не требует проведения повторных курсов лечения, а также эффективно защищает геном пациентов с описторхозом, так как приводит к снижению уровней первичных повреждений ДНК и апоптотических клеток до показателей доноров крови.
Лечение трихоцефалеза мебендазолом с ибупрофеном и комплексом витаминов с селеном не может полностью снизить генотоксический эффект инвазии власоглавами в лимфоцитах крови человека, а также добиться полной дегельминтизации и устранения симптомов заболевания. Комбинированное лечение пациентов с трихоцефалезом албендазолом с ибупрофеном и комплексом витаминов С, Е, β-каротин с селеном наиболее эффективный способ защиты генома. Эта схема терапии приводила к снижению уровней первичных повреждений ДНК и апоптотических клеток до показателей доноров крови, а также к полной элиминации клинических и лабораторных проявлений инвазии.
При серологическом обследовании лиц, трихинеллез легкой степени или перекрестные реакции наблюдаются в 0,74% случаев и 4,5% пациентов являются сероположительными по трихинеллезу. Среди сероположительных пациентов (титр 1:800 и выше) только 89,7% имеют клинически подтвержденный диагноз «трихинеллез средней тяжести».
При копроовоскопическом обследовании лиц, яйца кошачьего сосальщика выявляются в 0,16% случаев. У всех пациентов диагноз «описторхоз средней тяжести» был выставлен клинически. При серологическом обследовании лиц, в 0,63% выявляется хронический описторхоз или проявление перекрестных реакций и в 0,77% случаев описторхозу. У пациентов с подтвержденным копроовоскопически и клинически диагнозом «описторхоз средней тяжести» титры антител 1:800 и более выявляются только в 57,5% случаев. Среди жителей г. Витебска, Витебской области, а также пациентов Гомельской областной клинической инфекционной больницы и Жлобинской ЦРБ в 2008-2012 гг. трихоцефалез встречался в 0,27% случаев. Частота встречаемости трихоцефалеза, установленная нами, соответствует общереспубликанской за последние 10 лет, что показывает высокую значимость копроовоскопической диагностики заболевания.