English version
ОБСЛЕДОВАНИЕ КОШЕК НА КИШЕЧНЫЕ И МИГРАЦИОННЫЕ ФОРМЫ ГЕЛЬМИНТОЗОВ В ГОРОДЕ МОСКВЕ
Панова О.А.*, Написанова Л.А.*, Гламаздин И.Г.**
*ФГБНУ «Всероссийский НИИ фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений им. К.И.Скрябина»
**ФГБОУ ДПОС «Российская академия кадрового обеспечения агропромышленного комплекса»
Введение. Несомненно, что плотоядные животные, живущие с людьми в постоянном тесном контакте, и зараженные нематодами рода Toxocara, представляют для нас серьезную опасность [1, 5]. Синдром «larva migrans» у человека развивается при миграции личинок токсокар, что становится возможным после проглатывания инвазионных форм этих паразитов (созревших яиц) [1,5]. Чаще страдают дети, т.к. не имеют стойких гигиенических привычек и часто склонны к геофагии (поедание земли). Факторами передачи возбудителя инвазии для человека могут быть почва, играющая ведущую роль [4], волосяной покров животных, загрязненный яйцами паразита, продукты питания [2, 6, 8, 10]. В 2003 году Fisher представил анализ статей, доказывающих вовлечение Toxocara cati в патологический процесс висцерального токсокароза у людей [7]. Однако на сегодняшний день в нашей стране недостаточно изучены вопросы распространения токсокароза кошек, эффективность различных методов прижизненной диагностики, участие T.cati в патологии человека.
Следует отметить, что прижизненная диагностика во время миграции личинок аскарид у кошек возможна только при использовании серологических тестов. Считается, что период паразитарной инкубации T.cati от времени заражения составляет около 8 недель. К сожалению, на данный момент на коммерческом ветеринарном рынке страны не предлагаются серологические тесты для исследования кошек на токсокароз.
Целью наших исследований являлось изучить эпизоотические аспекты гельминтозной инвазии желудочно-кишечного тракта среди домашних, а также бродячих кошек, и разработать метод лабораторной серологической диагностики вида T.cati.
Материалы и методы. Материал для исследований получали от домашних и беспризорных кошек, поступавших в ветеринарное учреждение, в возрасте от 5 месяцев до 4-х лет. Паразитологическое исследование фекалий проводили в течение суток после сбора. Содержимое образцов фекалий от животных изучали двумя методами флотации – методом Фюллеборна и методом Котельникова-Хренова с аммиачной селитрой. Гельминтологический материал сохраняли в морозильной камере при –200С, предварительно отмытый в физиологическом растворе NaCl. Для получения сывороток отбирали кровь у животных, естественно зараженных токсокарами и другими паразитами (подтверждали копрологически и при вскрытии, а также от клинически здоровых кошек. Сыворотку аспирировали автоматическими пипетками в пробирки типа eppendorf. Для хранения материал помещали в морозильную камеру при –200С.
Микроскопические исследования проводили на микроскопах: микроскоп биологический (МБИ), микроскоп с системой визуализации объекта Carl Zeiss «AxioImager A2».
Для получения антигена (АГ) из T.cati использовали способ получения антигена, разработанный В.К.Бережко и др. [3]. Экстракт (надосадочную жидкость) использовали в качестве антигенного материала.
Сенсибилизацию стрипов АГ осуществляли в карбонатно-бикарбонатном буфере с концентрацией по белку 15 мкг/мл. Для исследования сывороток крови токсокарозных собак в каждую лунку вносили по 100 мкл исследуемой сыворотки, в градиенте концентраций 1:50-1:400. После промывки отмывочным раствором в каждую лунку вносили по 100 мкл конъюгата (Anti-Cat IgG (H+L)-Peroxidase, antibody produced in rabbit, Sigma-Aldrich, USA). Инкубировали, повторяли этап отмывки. Затем в лунки вносили по 100 мкл субстрата (ортофенилендиамин),который готовили непосредственно перед применением. Инкубировали. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл 2,5М раствора серной кислоты. Учет результатов проводили через 5 минут после внесения кислоты на фотометре при длине волны 492 нм.
Результаты и обсуждение. Проведено эпизоотическое обследование по паразитозам желудочно-кишечного тракта среди домашних и бродячих кошек. По результатам исследований было установлено, что в популяции кошек (N=44) инвазия гельминтом T. cati по частоте встречаемости занимает второе место и выявлена в 31,6% случаев с помощью флотации фекалий последующем подтверждении при вскрытии. Выявлено, что напряженность эпизоотического процесса в мегаполисе в основном поддерживается сочетанными инвазиями: T. cati + Dipylidium сaninum – 11 (26,8%); T. cati + D. caninum + Taeniidae – 1 (2,4%); T. cati + Taeniidae – 1 (2,4%); D. caninum + Taeniidae – 1 (2,4%).
Возраст кошек, подвергшихся гельминтологическому вскрытию, колебался от 5 месяцев до 4-х лет. Интенсивность инвазии (ИИ) T.сati у кошек в среднем составила 6 особей гельминтов. Блошиная инвазия, которая может обеспечивать возникновения дипилидиоза, обнаруживалась в 23 случаях от общего числа исследованных животных, т.е. 52,2%.
На сегодняшний день считается, что вид T.сati представляет риск здоровью человека. Человек заражается перорально, либо зрелыми яйцами аскарид с объектов внешней среды, либо личинками от другого паратенического хозяина [10]. По данным эпидемических исследований, токсокароз распространен повсеместно и, в некоторых странах, является самым часто встречаемым паразитарным зоонозом [5].
Получены предварительные результаты разработанной тест-системы на основе иммуноферментной реакции с 15 сыворотками крови, из которых 4 пробы изначально от кошек, зараженных токсокарами. Из них сыворотка от кошки под номером 2, в диагностических разведениях давала ложноотрицательный результат. По результатам гельминтологического вскрытия данной особи, T. сati были обнаружены только в полости желудка в пристеночной области и гельминты не достигли половой зрелости (предположительно личинки 3-й стадии). Согласно J.F.A. Sprent [5] в организме кошки все личинки токсокар достигают 3-й стадии своего развития на 19-й день с начала миграции, находясь при этом в стенке желудка и желудочном содержимом [9]. Подобный результат можно объяснить индивидуальными особенностями хозяина, в частности не быстрым и малоэффективным гуморальным иммунным ответом.
Также была зафиксирована положительная реакция с одной сывороткой кошки, токсокар в кишечнике которой обнаружено не было. В результате беседы с владельцами животного выяснено, что кошка все лето проводит на даче, активно охотится и питается грызунами и птицами, владельцы добросовестно проводят ежеквартальную дегельминтизацию. Можно предположить, что животное имеет постоянный контакт с возбудителем T. сati, т.к. грызуны и птицы являются резервуарными хозяевами для данного паразита (содержат в мышечной ткани личинки 2-й стадии). Но за счет своевременной дегельминтизации токсокары изгоняются из его организма.
Таким образом, нами были получены достаточно эффективные в диагностическом плане предварительные результаты и, планируется продолжать эксперименты в направлении отработки параметров лабораторного варианта тест-системы (ИФА).
Заключение. По результатам наших исследований можно сделать заключение о широком распространении токсокароза и дипилидиоза среди московской популяции кошек, что обеспечивает высокий риск заражения детей и взрослых. Копрологическая диагностика токсокароза у плотоядных животных не представляет затруднений во время выделения самками оплодотворенных яиц с фекалиями. Однако она не позволяет обнаружить гельминтов в стадии миграции и при наличии в кишечнике не половозрелых особей. По нашему мнению тщательное изучение параметров диагностической реакции является необходимой частью успешного контроля над токсокарозом и распространением возбудителя T. сati в окружающей среде.
Литература: 1.Бережко В.К., Написанова Л.А., Хайдаров К.А., Ястреб В.Б., Медведев А.Ю.//Патент РФ № 2487722. 2. De Oliveira C., Germano P. //Revista de sau´de pu´blica, 1992.- 26: 332. 3.Fisher M. //Trends Parasitol, 2003.- 19: 167-170. 4.Glickman L., Shantz P. // Epidem. Rev.- 1981.- Vol. 3.- P. 230-250. 5.Sprent J. F. A.//Parasitol., 1956. - № 46. - P. 54-79.
© 2015 The Author(s). Published by All-Russian Scientific Research Institute of Fundamental and Applied Parasitology of Animals and Plants named after K.I. Skryabin.
This is an open access article under the Agreement of 02.07.2014 (Russian Science Citation Index (RSCI) and the Agreement of 12.06.2014 (CABI.org / Human Sciences section).