УДК 619:615.37
Скачать статью в PDF формате
English version
ИЗУЧЕНИЕ АЛЛЕРГИЗИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ
ПРЕПАРАТА «КОКЦИДОН 2,5%» ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ
И ПРОФИЛАКТИКИ КОКЦИДИОЗА У ПТИЦ
Курочкина К.Г., Арисов М.В.
ФГБНУ Всероссийский НИИ фундаментальной и прикладной
паразитологии животных и растений им. К.И.Скрябина»
Введение. Аллергизирующие свойства это способность какого-либо вещества вызывать при введении его в организм состояние повышенной чувствительности (гиперчувствительность, сенсибилизация), в основе которых лежат иммунопатологические механизмы различного типа: анафилактический, цитотоксический; аллергические реакции, связанные с образованием иммунных комплексов и активацией комплемента; клеточный тип (реакция сенсибилизированных лимфоцитов). Аллергические реакции могут развиваться по «немедленному» или «замедленному» типу (НТ и ЗТ)). В реакции с аллергеном (при гиперчувствительности НТ) выступает IgE, в другом случае, при ЗТ- иммунные клетки типа Т-лимфоцитов [1, 2, 3].
При подборе тестов для испытаний фармакологических средств на аллергизирующую активность, следует подбирать тесты, которые позволяли бы выявлять различные типы реакций [7].
Целью настоящей работы является установление возможных сенсибилизирующих свойств нового отечественного препарата «Кокцидон 2,5%» (раствора для перорального применения) на лабораторных животных, поскольку учет сенсибилизирующих свойств обязателен и проводится после оценки токсичности всех новых лекарственных форм [5].
Материалы и методы. Препарат на основе толтразурила «Кокцидон 2,5%» применяется для профилактики и терапии кокцидиоза у птиц. Используют препарат с питьевой водой в дозе 7 мг толтразурила (ДВ) на 1 кг массы тела (28 мл 2,5%-ного раствора кокцидона на 100 кг массы птицы). Для сенсибилизации лабораторных животных терапевтическую дозу препарата пересчитывали для морских свинок и мышей.
Экспериментальная работа проводилась согласно Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (раздел Методические указания по оценке аллергизирующих свойств фармакологических веществ), 2005.
Результаты и обсуждение. Реакция воспаления на конканавалин А. Известно, что многие лекарственные средства и химические вещества высвобождают медиаторы аллергических реакций, в том числе гистамин, неспецифически, в результате прямого действия на тучные клетки и базофильные лейкоциты [1]. Кон А является неспецифическим активатором высвобождения медиаторов из тучных клеток и базофилов (гистамина, серотонина и др.), что приводит к отеку в месте введения, а препараты могут усиливать это действие, либо не вызывать усиление реакции на Кон А, т.е. не проявлять аллергизирующих свойств [8].
В результате проведенных исследований установлено (табл. 1), что у контрольных мышей реакция воспаления на Кон А была более выраженной и индекс реакции составил 15,01±1,64%, у животных, которым кокцидон 2,5% вводили в терапевтической дозе этот показатель составил 13,54±1,04%, у мышей, получивших препарат в десятикратной дозе был достоверно ниже – 9,82±0,95%.
Таблица 1
Оценка результатов реакции воспаления на Кон А у мышей
|
Препарат |
Доза |
Результаты исследования ИР (%) M+m |
|
Кокцидон 2,5% |
6 мкг/20 г |
13,54 ± 1,04 |
|
Кокцидон 2,5% |
60 мкл/20 г |
9,82 ± 0,95* |
|
Контроль |
- |
15,01 ± 1,64 |
*Р≥0,05
Таким образом, введение испытуемого препарата, в терапевтической и десятикратной терапевтической дозах, снижает ИР воспаления, т.е. сам препарат не стимулирует проявление воспалительной реакции, т.к., по-видимому, не вызывает усиления индукции медиаторов воспалительной реакции в отличие от Кон А. Кокцидон 2,5% не провоцирует проявление аллергической реакции, что установлено в этом опыте.
Выявление состояния сенсибилизации «in vivo». Тестирование морских свинок после различных схем введения испытуемого препарата (сенсибилизация) провели, используя кожную, конъюнктивальную и назальную пробы [3, 6].
Кожная проба. Через 10 дней после окончания введения испытуемого лекарственного препарата сенсибилизированным и контрольным морским свинкам на выстриженные участки кожи (2х2 см) нанесли, слегка втирая, препарат кокцидон 2,5%, а с противоположной стороны - воду. При визуальном учете через 15; 30 минут; 24 и 48 часов кожных реакций гиперчувствительности немедленного и замедленного типа не отмечали. Реакции оценивали по шкале в 0 баллов – видимой реакции нет.
По характеру кожной реакции: цвету кожи (отсутствие гиперемии) и толщине кожной складки (отсутствие инфильтрации) тестируемые участки не отличались у опытных и контрольных животных.
Конъюнктивальная проба. Опытным и контрольным животным в правый глаз закапывали испытуемый препарат, в левый – воду для инъекций. У сенсибилизированных морских свинок реакция не отличалась от проявлений реакции у контрольных животных. Животные на несколько секунд закрывали глаза (естественная реакция), затем глаза открывались, животные не трясли головой, не терли лапами морду, т.е. отсутствовало раздражающее действие. Не было отмечено каких-либо изменений сосудистого рисунка конъюнктивы глаз или ее общей гиперемии через 15, 30 минут и 24 часа. Реакция была оценена как отрицательная.
Назальная проба. При постановке провокационной назальной пробы, установлено, что внесение в носовые ходы испытуемого препарата сенсибилизированным и контрольным морским свинкам не вызвало гиперемии слизистой оболочки, чихания, отека или усиления секреции слизи у животных ни через 15 -30 минут ни через 24 часа, поэтому тест оценили как отрицательный.
Непрямая реакция дегрануляции тучных клеток. Сыворотку крови от сенсибилизированных и контрольных морских свинок исследовали в реакции непрямой дегрануляции тучных клеток. Тучные клетки, полученные из перитонеальной жидкости интактных крыс, при контакте с комплексом антиген-антитело на своей поверхности начинают разрушаться в том случае, если организм сенсибилизирован каким-либо аллергеном. Эту реакцию используют для диагностики аллергии к пищевым продуктам, пыльце растений, лекарственным препаратам [4, 5]. При постановке теста в случае аллергизации организма, аллерген образует комплекс с антителами, находящимися в сыворотке крови испытуемых животных, что и приводит к разрушению оболочки тучных клеток и выходу гранул (дегрануляция). Результаты постановки непрямой реакции дегрануляции тучных клеток приведены в таблице 2.
Таблица 2
Непрямая реакция дегранулированных тучных клеток
с сыворотками крови морских свинок после сенсибилизации
|
Группа |
Доза |
Схема сенсибили-зации |
Результаты исследования (%) |
|
1 |
0,0028 мл/100г (0,1ТД) |
30 дней |
5,0 |
|
2 |
0,028 мл/100 г (1ТД) |
двукратно с интервалом 24 часа |
5,33 |
|
3 |
0,14 мл/100 г (5ТД) |
двукратно с интервалом 24 часа |
5,89 |
|
Контроль |
- |
- |
5,67 |
Исследование сывороток крови (сыворотка исследуется трехкратно и берется среднее значение для каждого животного в группе) опытных морских свинок, после их сенсибилизации, показало отсутствие аллергизации организма у опытных животных всех трех групп, поскольку процент дегранулированных тучных клеток составил соответственно5,0; 5,33 и 5,89. У контрольных животных этот показатель был на уровне 5,67%. Положительным считается тест, если процент дегранулированных клеток превышает 10.
Таким образом, применение кокцидона 2,5% не привело к значимому изменению показателей непрямой реакции дегрануляции тучных клеток по сравнению с контролем, т.е. к сенсибилизации организма.
Заключение. Уровень аллергенной активности фармакологических средств устанавливается в зависимости от степени развития аллергического состояния, частоты и характера проявления аллергических реакций, что устанавливается в эксперименте на животных.
Результаты проведенных исследований по оценке кожной, конъюнктивальной, назальной проб, непрямой реакции дегрануляции тучных клеток, реакции воспаления на конканавалин А свидетельствуют об отсутствии у нового препарата кокцидон 2,5% для лечения и профилактики кокцидиоза у птиц, аллергизирующих свойств (согласно критериям оценки тестирования).
Литература:
1.Адо В.А., Астафьева Н.Г. Поллинозы. М. «Знание».- 1991.- 222с. 2.Онойко Н.Ю. Аллергия. Диагностика, профилактика и методы лечения. - М.: ЗАО Центрполиграф, 2004.- 157с. 3.Полный справочник (все об аллергии). Под ред. Морозовой Н.В. М. «Эксмо».- 2010. – С. 454-471. 4.Радунская С.Ф. Автореф. дис. … канд.биол.наук – М., 1982.- 16.с. 5.Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва.- 2005.- С. 54-59. 6. Суворов С.Д. и др. Ранняя диагностика профессиональных аллергодерматозов у рабочих железнодорожного транспорта (методические рекомендации). – М. 1985.- 25с. 7. Хорш Ф. М. Иммунопрофилактика болезней животных. М.: «Колос». 1981. – С. 117-121.
8. Khosrasi E. et al. //Inflamm. Res. -1995.- Vol.44.- P. 241-243.